ARTICULO ORIGINAL Rev. Methodo 2019;4(2):34- 40
https://doi.org/10.22529/me.2019.4(2) 02 Recibido 09 Oct. 2018 | Aceptado 29 Abr. 2019 | Publicado 30 Jun. 201 9
Frecuencia de micronucleos en células de la mucosa bucal en individuos expuestos a la radiación electromagnética de
teléfonos móviles: un estudio de replicación
Micronucleus frequency in cells of the oral mucosa in individuals exposed to electromagnetic radiation of mobile phones: a replication study
Daniel E. Lerda1, Brandon Mac Donald Cranmer2, María B. Maestre 2
1. Universidad Católica de Córdoba Facultad de Ciencias de la Salud, Clínica Universitaria Reina Fabiola. Laboratorio de Genética Molecular. 2. Universidad Católica de Córdoba Facultad de Ciencias de la Salud. Carrera de Odontología.
Correspondencia: Daniel Enrique Lerda. Laboratorio de Genética Molecular - Clínica Universitaria Reina Fabiola. Oncativo 1248 -X5004FHP- Córdoba, Argentina; email : daniellerda@curf.ucc.edu.ar .
Resumen
INTRODUCCIÓN: Hasta el momento, los resultados de distintas investigaciones sobre la exposición a Radiofrecuencias y sus consecuencias biológicas, son contradictorios. Nuestro estudio nace como un estudio de replicación, en conjunto con investigadores de la Escuela de Tecnología de la Salud de Lisboa, Lisboa, Portugal. Adoptamos el mismo diseño de estudio, para verificar si los resultados de su evaluación de la frecuencia de micronucleos (MN) en los usuarios de teléfonos móviles eran comparables a los resultados obtenidos en este estudio similar en Córdoba, Argentina.
MATERIALES Y METODOS: Para estudiar el daño del ADN por la exposición a radiofrecuencia asociada con el teléfono celular se estudiaron los MN (marcadores celulares de daño genómico) en células bucales exfoliadas, extraídas de frotis de células de las mejillas internas derecha e izquierda de usuarios de teléfonos celulares en 83 voluntarios sanos de 18 a 36 años. Las frecuencias de MN fueron analizadas por la duración y el lado preferencial de uso del teléfono celular.
RESULTADOS: no se observó relación entre la frecuencia de MN y la duración del uso como tampoco con el lado preferencial.
CONCLUSION: nuestros resultados sugieren que la exposición a radiofrecuencia en los niveles obser vados no induce la formación de MN en células bucales.
Palabras claves: campos electromagnéticos, teléfonos celulares, micronucleos, genotoxicidad.
Abstract
INTRODUCTION: the results of various research on radiofrequency exposure and its biological consequences are contradictory. Taking into account this reasoning, our study was born as a replication study, together with researchers from the School of Health Technology of Lisbon, Lisbon, Portugal. We adopted the same study design, to verify if the results of your evaluation of the frequency of micronuclei (MN) in cell phone users were comparable to the results obtained in this similar study in ordoba,
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Argentina.
MATERIALS AND METHODS: To study ADN damage from radiofrequency exposure associated with cell phone, MN (cell markers of genomic damage) were studied in exfoliated buccal cells, extracted from right and left internal cheek cell smears of cell phone in 83 healthy volunteers from 18 to 36 years. RESULTS: The MN frequencies were analyzed by the duration and the preferential side of use of the cell phone. No relationship was observed between the MN frequency and the duration of use as well as the preferential side.
CONCLUSION: our results suggest that exposure to radiofrequency in the observed levels does not induce the formation of MN in buccal cells.
Keywords: electromagnetic fields, cell phones, micronuclei, genotoxicity.
Introducción
Existe un uso masivo de teléfonos celulares, desde niños hasta adultos mayores. La Agencia Internacional de Estudios sobre Cáncer1 y la Organización Mundial de la Salud2 han repo rtado en el mundo unos 500 x 106 usuarios de teléfonos celulares, por lo que ha generado preocupación por los efectos de la radiación electromagnética en el rango de micro ondas. Hasta el momento, los
con daño en el ADN, que se inicia con una serie de eventos celulares críticos, la mayoría de ellos bastante bien caracterizados. El daño en el ADN puede detectarse por diversos medios, como la secuenciación del genoma completo y otros métodos a nivel molecular. Sin embargo, el daño en el ADN también puede detectarse a nivel morfológico, y los cambios morfológicos se
resultados de distintas investigaciones sobre la consideran marcadores biológicos o
exposición a radiofrecuencias y sus consecuencias "biomarcadores" (marcadores celulares ,
biológicas, son contradictorios3. Es conocido el calentamiento dieléctrico en los tejidos biológicos por la radiación electromagnética4. En el caso de la telefonía celular, la radiación electromagnética
bioquímicos o moleculares que se pueden medir en matrices biológicas, como tejidos, células y fluidos)13.Los micronúcleos (MN) son biomarcadores de genotoxicidad ambiental y
penetra, pudiendo ser absorbida por el cerebro y riesgo de cáncer14.Las evaluaciones de MN
transformada en calor, acumular energía en un corto tiempo y si el cerebro es perturbado por ondas electromagnéticas pueden producirse
efectos fisiológicos5. Otros investigadores6 no han confirmado esos resultados en estudios de células in vitro. Tampoco fue confirmado por otros grupos7 en estudios sobre ratas. Habría también efectos no térmicos producidos por campos magnéticos de baja frecuencia provenientes de la batería del teléfono. El riesgo de tumores cerebrales es un tema muy discutido, algunos trabajos han informado relaciones causales entre la exposición a campos electromagnéticos de radiofrecuencia y un mayor riesgo de neurona acústico8, glioma9, meningioma10 y cambios metabólicos en el tejido cerebral, pero otros no han logrado reproducir estos resultados10. Ante esta incertidumbre la Agencia Internacional para la Investigación del Cáncer (IARC) clasificó a campo electromagnético de radiofrecuencia como "posiblemente cancerígeno"11. El rango de estos oscila entre 100 kHz y 300 GHz y genera campos electromagnéticos que pueden afectar a las células vivas, aunque solo a niveles muy altos de
exposición12. En la actualidad, generalmente se acepta que el cáncer se origina, necesariamente,
utilizando la tinción histoquímica de Feulgen 15
pueden detectar aumentos de las frecuencias de
MN y representan un biomarcador estandarizado de genotoxicidad y daño cromosómico14,16 y la mucosa oral es una matriz muy utilizada para las evaluaciones de frecuencia de MN. En el presente estudio se siguieron los procedimientos de MN en mucosa oral descrito en el “Proyecto de MN humano sobre células bucales exfoliadas” (HUMNXL)17. Dado que la exposición debería ser máxima en el epitelio oral adyacente, probamos las frecuencias de MNen las mejillas internas derecha e izquierda. Teniendo en cuenta este razonamiento , nuestro estudio nace como un estudio de replicación, en conjunto con investigadores de la Escuela de Tecnología de la Salud de Lisboa,
Lisboa, Portugal .
O bjetivo
Evaluar la afectación de las células de la mucosa yugal a través del impacto de las frecuencias de micronucleos en los usuarios de teléfonos
celulares18 .
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Materiales y métodos
Población en estudio
Se estudiaron 83 voluntarios sanos, de 18-36 años, que se encuentran en la carrera de Odontología en la Universidad Católica de Córdoba Facultad de Ciencias de la Salud. Se realizó encuesta sobre datos demográficos (sexo, edad, lugar de nacimiento), antecedentes sociales y ambientales (ocupación, duración y cambios recientes de ocupación), residencia en la proximidad de aeropuertos o helipuertos, consumo de tabaco y alcohol, carne, pescado, consumo de frutas y verduras, suplementos vitamínicos y no vitamínicos, antecedentes familiares de c áncer, medicamentos crónicos, intervenciones odontológicas, radiografías dentales y exposición a los campos electromagnéticos (años de uso del teléfono móvil, uso diario en minutos, uso preferente durante los últimos 21 días). También se preguntó a los participantes sobre el uso de audífonos o altavoces, para permitir la estimación de la duración de la llamada diaria considerando solo aquellas llamadas en las que el teléfono se colocó directamente al lado de la cabeza.
Recolección de muestras
Se tomaron dos muestras separadas de cada persona, una de la mucosa yugal derecha e izquierda. La recolección fue realizada por un operador capacitado utilizando un cepillo citológico estéril por muestra. Cada muestra se colocó en portaobjetos etiquetados con el número de identificación del sujeto y el lado de la colección (derecha / izquierda). Las preparaciones se fijaron con Fixative Biopur (Celular), se dejaron secar durante un mínimo de 24 h se guardaron en cajas de almacenamiento, hasta que se tiñeron.
Análisis de micronucleos
Los portaobjetos se tiñeron según el método de Feulgen15 y se secaron al aire antes de mont arlos
con medio sintético. Se contaron 1000 células epiteliales por portaobjetos (2000 células por sujeto) por un solo observador entrenado en un microscopio Leica 2000A, a 1000 X amplificación con aceite de inmersión. Los MNse clasificaron de
acuerdo a Thomas, P. et al20 y Ceppi, Met.al. 21
Análisis estadístico
Se realizó un muestreo de conveniencia (no
probabilístico). El tamaño de la muestra fue elegido de acuerdo con Preston Hoffman.19 El
análisis se llevó a cabo utilizando el software R Studio©, versión 2.1. La prueba de normalidad de Shapiro-Wilk de la variable dependiente
(frecuencia de MN en 2000 células) presentó una distribución no normal y por ello se realizaron las pruebas de Wilcoxon y Kruskal-Wallis22 .Se consideró valor significativo a una p < 0,05.
R esultados
La edad media de la población estudiada fue de 25,5 años (+/- 2,51, rango 18-36) y la relación hombre-mujer fue de 1,77: 1. La historia promedio del uso de dispositivos móviles en años fue 10,5 (+/- 2,11; rango 5-18) con una duración media de llamadas diarias en minutos de 20,2 (+/- 15,22; rango 2 -90). 83,1% de los sujetos (n = 69) informaron el lado derecho como el lado preferencial de uso; aproximadamente el 7,2 % (n = 6) informó el lado izquierdo y el 9,6% (n = 8) n o especificó un lado preferido. Con respecto al MN, biomarcador en estudio, la media fue de 2,05 (+/ - 1,67, rango 0 - 8) en 2000 células. No hubo diferencias estadísticamente significativas por sexo, los hombres (n = 30) con una incidencia media de 1,99 MN (+/- 1,33), y las mujeres (n = 53) con una incidencia media de 2,2 MN (+ / - 1,55) (prueba de Wilcoxon, p = 0.0998). Los individuos fueron subdivididos en tres grupos de edad para los cuales las frecuencias medias de MN por 2.000 células fueron: 18-21 años (n = 44), 2.10 (± 2.00); 22-25 (n = 36), 1,55 (± 1,20); 26- 30 (n = 3), 1,73 (± 1,33). No se observó una relación estadísticamente significativa entre los grupos de edad y la frecuencia media de MN (p = 0.1810) . En la Figura 1 se muestra la comparación entre este estudio y el de replicación. No se encontraron asociaciones entre la media de MN y las variables evaluadas en el cuestionario: ocupación, consumo de alcohol, carne, pescado, verduras, frutas, suplementos dietéticos, residencia cercana a un aeropuerto o helipuerto, antecedentes familiares de cáncer, medicamentos crónicos, intervenciones odontológicas y radiografías dentales (prueba de Wilcoxon, p> 0,05; prueba de Kruskal- Wallis, p>0,05 para todos los parámetros). En este estudio, no se observaron diferencias significativas al analizar MN entre grupos de fumadores (n=30) y no fumadores (n=53) (p>0,05). Ningún sujeto informó el consumo de más de 40 cigarrillos / día, el umbral por encima del cual se ve normalmente un impacto en la frecuencia de MN en la mucosa
bucal17.Ningún sujeto informó exposición regular a sustancias con propiedades genotoxicas conocidas. No se encontraron diferencias estadísticamente significativas cuando los sujetos
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fueron agrupados por intervalos de uso del teléfono celular en años y MN. Las frecuencias de MN por 2000 células fueron las siguientes: 9 años o menos (n = 11), 1,93 (+/- 1, 50); 9-13 años (n = 53), 1,43 (+/- 1,22) y> 13 años (n = 19), 2,01 (+/ - 1,33) (prueba de Kruskal-Wallis, p = 0.6115). En la Figura 2 se muestra la comparación entre este estudio y el de replicación. La frecuencia de MN y el lado de uso del teléfono no mostró asociación; las frecuencias medias de MN por 2000 células fueron: lado izquierdo, 1.00 ± 1.08 versus lado derecho, 1.02 ± 0.96 (prueba de Wilcoxon, p = 0.4310).
proporcionarnos mayores conocimientos sobre las posibles consecuencias biológicas de la exposició n a campos electromagnéticos de radiofrecuencia. Los estudios in vitro utilizando campos electromagnéticos de radiofrecuencia no presentan correlación con los patrones de emisión de radiación de los teléfonos celulares y hasta la fecha, no existe un método confiable para cuantificar los efectos de los teléfonos celulares en las condiciones de uso (in vivo)23, esto se debe a que como son ondas electromagnéticas, están sujetas a reflexión, dispersión y transmisores simultáneos que interfieren. Esto resulta en un complejo campo de propagación múltiple, espacialmente no uniforme y muy difícil de
medir24.El proyecto multinacional
Figura1. Comparación con grupos de edades y MN entre grupos de Córdoba y Portugal. Valores Absolutos y Desviación estándar .
Figura 2. Comparación en intervalos de uso del móvil en años y MN entre grupos de Córdoba y Portugal. Valores Absolutos y Desviación estándar.
Discusión
En nuestra población estudiada, ni la duración de la exposición electromagnética ni el lado de uso presentaron correlaciones estadísticamente significativas con la frecuencia de MN. Por lo tanto, como objetivo primordial, observamos que el diseño de estudio similar en una población análoga produjo resultados muy similares a los de
Oliveira18 Consideramos que estas observacio nes son importantes, ya que las evaluaciones sistemáticas de las anomalías nucleares en los usuarios de teléfonos celulares pueden
INTERPHONE25, referido a 13 países, estudió los casos de glioma (tumor de células gliales del cerebro o médula espinal) y meningioma ( tumor usualmente benigno de tejido aracnoideo de l as meninges que se adhiere a la duramadre) y determinó que no habría una conexión sólida entre tumores cerebrales y telefonía celular, siendo necesarias mayores investigaciones para una conclusión definitiva. Estos resultados llevaron a los expertos a impugnar la clasificación del I ARC sobre los campos electromagnéticos de radiofrecuencia, debido a la falta de “evidencia de
mecanismos basados en la genotoxicidad"26 . Hardell et al.27analizaron el riesgo de tumores
cerebrales tras más de diez años de uso de celulares, encontrando que hubo un incremento en el riesgo de gliomas malignos; hubo una conexión entre el empleo de celulares y el riesgo de neuromas acústicos; los tumores comúnmente ocurren en el lado de la cabeza donde se usa el celular y una hora de uso de celular al día incrementa el riesgo de tumor después de 10 o más años. Posteriormente Hardell et al28 confirmaron el estudio anterior, estableciendo que el uso de celulares antes de la edad de 20 años, increme nta el riesgo de tumores en 5,2 veces comparado con 1,4 veces para otras edades, concluyendo que a largo plazo el empleo normal de celulares no es seguro. Otro estudio sugiere que el uso por más de una década de celulares se asocia al incremento de
riesgo de neuroma acústico benigno. 29
Panagopoulos et.al30, hallaron una reducción de la capacidad reproductive de la mosca de la fruta, cuando la expusieron a radiofrecuencia de celulares, desde 0,9 a 1,8 GHz, sugiriendo alteraciones en las moléculas de ADN induciendo muerte celular. Los hallazgos de nuestro trabajo
como el de Oliveira18 en donde utilizaron la misma radiofrecuencia que en este trabajo, concuerdan con una revisión publicada en 2010
por Vershaeve31y otros miembros del Com ité Permanente de Biología de la Comisión Internacional de Protección de la Radiación No
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Ionizante, en donde declararon que la exposición a bajo nivel de radiofrecuencia, los efectos genotoxicos son muy débiles, tanto in vivo como in vitro. La utilización del MN, marcador de rotura de ADN, para evaluar los efectos de los campos electromagnéticos, son capaces de producir rotura de ADN según lo descripto por Panagopoulos 30
y Ruediger32, aunque otras pu blicaciones contrarrestan estos hallazgos33.Las conclusiones
contradictorias en la literatura sobre este tema revelan una brecha seria en la comprensión de la interacción de los campos electromagnético de radiofrecuencia con las células. Por ejemplo, probablemente no sea sorprendente que la exposición in vitro a la radiación de onda continua de 915 MHz durante 72 h, muestren un aumento de diez veces las frecuencias de MN, pero es bastante difícil transpolar este ajuste al uso cotidiano que las personas hacen de los teléfonos celulares. Respecto a la aplicación de los resultados obtenidos sobre los efectos de los campos electromagnético de radiofrecuencia correspondiente a la telefonía celular hay que tener una enorme precaución. Parece claro que no existe en la actualidad una gran cantidad de datos que permitan concluir si la exposición a campos electromagnéticos de radiofrecuencia durante el uso normal de un teléfono celular puede producir o no efectos nocivos sobre la salud. Puesto que los parámetros de estos, tales como frecuencia, intensidad, duración, modulación, forma de onda, son esenciales para determinar la respuesta biológica, es necesario investigar mucho más en la interacción de tales parámetros con la respuesta de la señal de un celular en condiciones normales, ya que no hay hasta el momento un método ultrasensible para detectar cambios. Algunos investigadores dan por científicamente probados los efectos biológicos no térmicos de los campos electromagnéticos de radiofrecuencia de niveles intermedios y bajos. Otros investigadores, sin embargo, no confirman la opinión anterior asegurando que esos resultados son meramente especulativos, afirmando que haya o no conexión entre los efectos y la exposición a campos electromagnéticos de radiofrecuencia, éstos sólo se producen a niveles muchos mayores de los que se encuentran en aplicaciones de telecomunicaciones. Finalmente, destacamos algunos aspectos limitantes de nuestro estudio y que tiene que ver con la autonotificación, relacionada con el lado como la duración del uso del teléfono celular. El sesgo del autoinforme34 es un obstáculo en la investigación epidemiológica, pero a la vez es una manera de evaluar ciertas variables y debe aceptarse que este sesgo se podría expresar a través
de todos los factores del estudio35. En cuanto al recuento de MN es subjetiva y laboriosa, pero las correlaciones analizadas mostraron valores de p
altos que solo un gran aumento en el recuento de MN podría alterar las asociaciones observadas a niveles estadísticamente significativos, por lo que creemos que es seguro asumir que no se pasó por alto una verdadera relación entre las v ariables debido a la puntuación subjetiva.
Conclusiones
En la actualidad existe un uso masivo de teléfonos celulares, desde niños hasta adultos mayores, por lo que ha generado preocupación por los efectos de la radiación electromagnética en el rango de micro ondas. Además, los resultados de las distintas investigaciones sobre los efectos de la radiación electromagnética en los seres humanos son contradictorios. El presente estudio replica los hallazgos del estudio de Portugal (Oliveira, 2017) sobre los efectos de la exposición a radiofrecuencia y la formación de MN en células bucales. Demostrando que la exposición a radiofrecuencia en los niveles observados no induce formación de micronucleos en células bucales.
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Revista Methodo: Investigación Aplicada a las Ciencias Biológicas. Universidad Católica de Córdoba. Jacinto Ríos 571 Bº Gral. Paz. X5004FXS. Córdoba. Argentina. Tel.: (54) 351 4517299 / Correo: methodo@ucc.edu.ar / Web: methodo.ucc.edu.ar |ARTICULO ORIGINAL Rev. Methodo 2019;4(2):34- 40
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